乙肝药物发现途径，靶向X蛋白，可能有助控制cccDNA转录

在开辟新的药物发现途径中，直接靶向乙肝病毒cccDNA，消除或灭活cccDNA的能力，被全球科学家认为是功能性治愈HBV的“圣杯”。目前，一些完全灭活cccDNA的潜在有用工具是CRISPR-Cas9核酸内切酶系统，简单介绍一下它。

乙肝药物发现途径，靶向X蛋白，可能有助控制cccDNA转录

它能够用于执行RNA引导的cccDNA破坏和诱变。CRISPR-Cas9核酸内切酶与合成的引导RNA（gRNA）复合，该RNA与cccDNA的靶序列完全匹配，从而切割了所选区域。因此，目前看来，想要使HBV cccDNA失活，就需要几个靶向HBV基因组中多个不同位点的gRNA。而整合HBVDNA在CRISPR-Cas9介导的失活中也十分敏感，这可能导致宿主基因组的改变与随后的基因功能异常。

这种编辑方法在临床研究之前，实际上，还需要解决很多潜在问题。这些问题包括不完整的cccDNA降解，需要把CRISPR-Cas9系统转移至所有感染的肝细胞和肝外细胞的递送系统，潜在的脱靶效应，针对细菌酶的免疫反应可能引起严重的毒性以及编辑整合的染色体HBVDNA的不可预测效果。ZFN和TALEN，前期已有详细介绍过。

ZFN，指的是锌指核酸酶；TALEN，指的是转录激活因子样效应子核酸酶。它们目前被认为是可以作为破坏HBV cccDNA的其他方法。这些方法可能会减慢抗药性HBV株的生长，并增加病毒应答时间延长可能性。但是，这些方法也存在一定研究局限性，比如脱靶活性，对整合的HBVDNA影响以及免疫应答的潜在诱导障碍。

TALEN，它属于目前全球新开发的核酸酶技术，可以裂解选定的DNA序列，从而导致基因破坏。全球已经开发了几种类型的TALEN，它们靶向不同HBV基因型之间的病毒DNA保守区域。总体上看，TALEN相比较ZFN，具有更高的特异性靶向与灭活HBV基因组，并与IFN-α协同改善抗病毒活性。所以，这项技术也被科学界认为，它是提供了一种治疗HBV感染的潜在策略。

还有一些新发现，也值得向各位读者朋友介绍交流。例如，直接靶向HBV X蛋白，它可能是有助于控制cccDNA转录的另一种方法。HBx诱导Smc5/6复合体的蛋白酶体降解，这种复合体通常抑制cccDNA转录。因此，通过抑制HBx蛋白，将阻止现有cccDNA分子表达所有HBV转录物，并抑制新cccDNA分子形成。cccDNA的形成也可以直接用取代的磺酰胺靶向，而这些磺酰胺可以干扰rcDNA向cccDNA的转化。

综合来看，直接靶向cccDNA，促使cccDNA的永久灭活或降解的相关技术都已经在上方介绍。通过了解宿主酶（如TDP2，FEN1和Pol-K）在cccDNA形成中的作用，已有实现了破坏cccDNA的步骤。同样，对病毒微型染色体形成和功能不可或缺的宿主细胞核组蛋白与染色质修饰酶的鉴定，也开辟了新的药物发现途径。

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